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高压冷冻应用及送样须知

1.高压冷冻应用

常规透射电镜超薄切片样品制备时,样品经过醛类-四氧化锇双固定、脱水剂梯度脱水、树脂浸透、包埋超薄切片、染色,随后在透射电镜下观察。醛类-四氧化锇作用时间长,选择性固定细胞内的物质成分,脱水时会导致物质抽提。

高压冷冻固定制样则可以在50ms内瞬间将细胞玻璃化,有效厚度为200微米,因此我们可以捕捉到细胞内的高度动态变化的过程。高压冷冻后,样品可以进行后续冷冻替代,低温下固定、脱水,会减少物质抽提,细胞内膜结构平滑。如下图所示:

高压冷冻仪器型号为HPM100,可进行直径3mm/6mm样品冷冻固定,同时也可以进行光电关联实验(将仪器推到显微镜旁,观察完立即冷冻固定)。此外,直径大于20微米以上的样品可以滴到铜网上,冷冻固定后与FIB/SEM结合使用(直径20微米以下快速冷冻固定即可)。

2. 送样须知:

  1. 培养细胞:提前到平台取蓝宝石片。
  2. 动物组织样品:带动物到平台解剖,鼠脑样品需要制备成可进行电生理实验的脑切片。
  3. 植物以及悬浮样品,如拟南芥、烟草、藻类、菌、酵母等,直接带鲜活样品到平台。

3. 联系方式:

清华大学蛋白质研究技术中心细胞冷冻电镜平台 ,

郑裕彤医学楼E220

李英 liying@biomed.tsinghua.edu.cn,

15210186244/010-62771601

欢迎各位同学致电咨询!

 

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